接種/分裝

火焰圈保護(hù)接種

準(zhǔn)備工作：操作人數(shù)以3人最佳，非操作人員離開(kāi)房間，操作人員帶好口罩，隔熱手套；關(guān)閉門(mén)窗、空調(diào)風(fēng)扇；3人分別負(fù)責(zé)持接種鉗、傳遞種瓶和接種。
注意：嚴(yán)禁帶橡膠或者塑料薄膜手套，一旦發(fā)生燒傷會(huì)更嚴(yán)重。
? 用濕抹布蓋住攪拌電機(jī)以及周?chē)艿?，以防止電機(jī)和硅膠管被燒壞。
? 向火圈棉花上滴酒精至飽和并置于接種口。
? 關(guān)小進(jìn)氣流量，全開(kāi)尾氣閥門(mén)。
? 預(yù)先擰松接種口蓋子。
? 持接種鉗者用接種鉗鉗住接種口蓋子，點(diǎn)燃火圈，用接種鉗擰下接種口蓋子，并置于接種口遠(yuǎn)離接種者方向，蓋子內(nèi)測(cè)朝向火焰。
? 傳遞種子瓶者將捆扎棉線解下，如是棉塞，將棉塞外部包裹紗布曲線，遞給接種者。
? 接種者在火焰旁邊取下種瓶紗布或棉塞，火燒種瓶瓶口一圈后緩慢將種子液倒入罐中。然后遞給傳遞種瓶者，同時(shí)，傳遞種瓶者將下一瓶種子遞給接種者。
? 所有接種完成后持接種鉗者擰上罐蓋，用濕抹布熄滅火圈，恢復(fù)罐壓和通氣并根據(jù)工藝設(shè)置其他參數(shù)和自控。
注意： 預(yù)先估計(jì)接種時(shí)間，保證火焰時(shí)間足夠長(zhǎng)，如果種瓶數(shù)量較多，預(yù)先合瓶。
注意：接種速度不宜過(guò)快，否則可能會(huì)導(dǎo)致種子液溢出，導(dǎo)致無(wú)菌失效。
注意：接種后和種瓶上部溫度很高，禁止手持種瓶上部。
注意：嚴(yán)禁向燃燒的火圈上添加酒精。
注意：火圈掉落地面后立即用濕抹布覆蓋。

發(fā)酵液分裝/蠕動(dòng)泵接種

發(fā)酵液分裝一般在現(xiàn)場(chǎng)操作，需要火焰保護(hù)；蠕動(dòng)泵接種在無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行。
發(fā)酵液分裝/蠕動(dòng)泵接種準(zhǔn)備階段需要將無(wú)菌快接裝置與補(bǔ)料口連接，用止水夾夾死，末端用紗布和牛皮紙包扎。
? 在無(wú)菌操作臺(tái)（蠕動(dòng)泵接種）或者火焰保護(hù)下（發(fā)酵液分裝）將無(wú)菌快接頭兩側(cè)牛皮紙和紗布取下，并對(duì)接。
? 打開(kāi)止水夾，用蠕動(dòng)泵或壓力將種子或者發(fā)酵液壓入罐內(nèi)。
? 接種/分裝結(jié)束后發(fā)，用止水夾夾住反應(yīng)器側(cè)無(wú)菌接頭連接軟管，斷開(kāi)無(wú)菌接頭，并將反應(yīng)器放回操作臺(tái)。
? 連接反應(yīng)器通氣、溫控、電極等所有需要的連接。
? 控制面板上設(shè)置流量到工藝流量，打開(kāi)空氣進(jìn)氣管上止水夾，并觀察確認(rèn)有氣體進(jìn)入。
? 連接尾氣管路到尾氣緩沖瓶，全開(kāi)尾氣至過(guò)程質(zhì)譜閥門(mén)，通過(guò)尾氣閥門(mén)控制罐壓在0.03-0.05MPa。
? 待壓力穩(wěn)定后，小心的打開(kāi)無(wú)菌接頭軟管上的止水夾，將軟管內(nèi)殘余液體排出然后重新夾死。
? 設(shè)置其他參數(shù)為工藝參數(shù)，并根據(jù)需要設(shè)置自控。

培養(yǎng)

補(bǔ)料

補(bǔ)料瓶制作

? 棉塞補(bǔ)料瓶：取合適大小方形雙層紗布，中間依照補(bǔ)料硅膠管管徑大小穿孔，瓶?jī)?nèi)硅膠管長(zhǎng)度到平底，將紗布蒙住瓶口，硅膠管置于中央，逐層填充棉花，直到紗布進(jìn)入瓶?jī)?nèi)2/3，繼續(xù)在瓶口堆棉花，然后扎緊紗布。
注意：棉花不能使用醫(yī)用脫脂棉。
注意：瓶?jī)?nèi)管口要斜切，防止吸附到瓶壁無(wú)法出液。
注意；棉花填充松緊程度以拔出棉塞能聽(tīng)到砰的一聲為好。
? 藍(lán)蓋瓶補(bǔ)料瓶：使用藍(lán)蓋瓶專(zhuān)用打孔瓶蓋和不銹鋼內(nèi)蓋，其中內(nèi)蓋兩接頭朝向外側(cè)，單接頭朝向內(nèi)側(cè)。內(nèi)測(cè)連接硅膠管，長(zhǎng)度到瓶底；外側(cè)與內(nèi)側(cè)硅膠管連通口連接約2米硅膠管，另一口連接約20厘米硅膠管并在末端連接呼吸器。
? 連接補(bǔ)料針頭/無(wú)菌快插接頭：將硅膠管出口一側(cè)連接補(bǔ)料針頭/無(wú)菌快插接頭，并用扎帶或者棉繩扎緊。
? 直接連接發(fā)酵罐：補(bǔ)料硅膠管不連接補(bǔ)料針頭/無(wú)菌快插接頭而是直接連接到發(fā)酵罐，并隨發(fā)酵罐一同滅菌。滅菌時(shí)，用止水夾夾死硅膠管。

補(bǔ)料瓶的計(jì)量

? 記錄空瓶質(zhì)量（包括棉塞和硅膠管），固體料質(zhì)量，溶解后質(zhì)量，消后質(zhì)量。
? 瓶中溶液質(zhì)量濃度=固體料質(zhì)量/（消后質(zhì)量-空瓶質(zhì)量）

補(bǔ)料瓶的消毒

? 將補(bǔ)料針裝入無(wú)蓋的10mL離心管，在離心管口處對(duì)折，用紗布和牛皮紙包扎。
? 在補(bǔ)料管靠近瓶口處用棉線或者止水夾加緊管道。
? 放入滅菌鍋消毒。

針插式補(bǔ)料接口連接

? 擰松補(bǔ)料接口帽。
? 點(diǎn)燃酒精棉球并置于補(bǔ)料口旁邊。
? 擰開(kāi)補(bǔ)料接口。
? 取出補(bǔ)料針。
? 對(duì)準(zhǔn)補(bǔ)料硅膠墊中心位置，豎直扎入。
? 熄滅酒精棉球。
? 用就行棉球塞住補(bǔ)料針周?chē)恢谩?br /> ? 管道裝入蠕動(dòng)泵并加緊。
? 打開(kāi)止水夾即可按工藝補(bǔ)料。
注意：消泡和pH控制的補(bǔ)料瓶制作同上，以下不再敘述。氨水、甲醇等易揮發(fā)物質(zhì)不能進(jìn)行高溫消毒。
5L玻璃反應(yīng)器只有一個(gè)針插式補(bǔ)料接口，一批發(fā)酵多次使用會(huì)增加染菌幾率。

無(wú)菌快插接頭連接

? 在火焰保護(hù)下，連接無(wú)菌快插接頭并固定。
? 打開(kāi)止水夾即可按工藝補(bǔ)料。

自動(dòng)/手動(dòng)補(bǔ)料

? 手動(dòng)補(bǔ)料：按下面板上手動(dòng)補(bǔ)料按鈕，補(bǔ)料泵將持續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)，直到到達(dá)所需補(bǔ)料量。
? 自動(dòng)補(bǔ)料：按下面板上自動(dòng)補(bǔ)料按鈕，補(bǔ)料泵將按照設(shè)定的占空比控制泵的開(kāi)停。

換料

? 當(dāng)一瓶補(bǔ)料接近用完時(shí)，在控制面板上停止自動(dòng)或者手動(dòng)補(bǔ)料。
? 如果有對(duì)應(yīng)的稱(chēng)重計(jì)量，將累計(jì)按鈕復(fù)位。
? 將補(bǔ)料管用止水夾夾住并從蠕動(dòng)泵上取下。
? 按照上述方法將一瓶新的補(bǔ)料連接到補(bǔ)料接口上。
? 如果有對(duì)應(yīng)的稱(chēng)重計(jì)量，將新的補(bǔ)料瓶放置到原來(lái)的電子秤上并將累計(jì)按鈕置位。
? 繼續(xù)按照工藝補(bǔ)料。
注意：如果沒(méi)有按照要求置為或者復(fù)位累計(jì)按鈕，會(huì)使得補(bǔ)料累計(jì)不準(zhǔn)確。
注意：5L罐只有一個(gè)針插式補(bǔ)料接口，多次使用此接口會(huì)增大染菌概率，5L罐應(yīng)盡量避免換料。

消泡

? 手動(dòng)消泡，按下面板上手動(dòng)按鈕，消泡泵將持續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)泵入消泡劑。
? 自動(dòng)消泡，連接好液位傳感器，當(dāng)有泡沫時(shí)，系統(tǒng)報(bào)警，同時(shí)啟動(dòng)消泡泵，按照設(shè)定的占空比補(bǔ)加消泡劑。
? 作為補(bǔ)料，按下消泡模式，可將消泡泵作為補(bǔ)料泵使用，方法同上所述。

pH控制

? 首先確定發(fā)酵過(guò)程中pH控制方向，在面板上確認(rèn)控制方式。
? 連接好酸（堿），點(diǎn)下面板上的pH自動(dòng)。當(dāng)pH向控制方向的反方向偏移超過(guò)設(shè)定值后，就會(huì)自動(dòng)補(bǔ)加酸（堿）。

取樣

準(zhǔn)備工作

? 發(fā)酵罐準(zhǔn)備階段，按照下圖示意，連接軟管2和5，并用止水夾夾住5的末端。
? 如果發(fā)酵液中有固體，并且可能堵塞取樣口，則將1和2斷開(kāi)，將1封堵，將過(guò)濾器到發(fā)酵罐之間軟件加裝三通，額外的開(kāi)口與2斷開(kāi)側(cè)連接，滅菌時(shí)用止水夾夾住三通到3之間的軟管。

取樣

? 取樣前首先用止水夾夾住圖中2所示軟管，小心打開(kāi)軟管5的止水夾，即可完成取樣。

取樣結(jié)束

? 打開(kāi)軟管2止水夾，罐體頂部的空氣就可將取樣管內(nèi)殘余的液體排出。

結(jié)束

停止發(fā)酵

? 用止水夾夾死過(guò)濾器到罐體之間管路。
? 關(guān)閉所有自控（溫度、pH、流量、攪拌、DO）
? 尾氣緩沖瓶排氣閥門(mén)全開(kāi)，到質(zhì)譜閥門(mén)關(guān)閉。
? 壓力表讀數(shù)到零后，斷開(kāi)排氣管路和尾氣緩沖瓶的連接，空氣進(jìn)氣管和發(fā)酵罐的連接以及循環(huán)水接頭與控制柜的連接。
注意：禁止帶壓狀態(tài)斷開(kāi)空氣進(jìn)氣管或者關(guān)閉空氣。
? 取下攪拌電機(jī)，妥善放置。
? 小心的取出pH和DO電極，清洗后妥善放置。

滅活發(fā)酵液

? 依次擰下罐蓋固定螺絲，小心的取出罐蓋。
? 根據(jù)需要將發(fā)酵液滅活處理。

清洗

? 玻璃罐體內(nèi)外洗干凈，對(duì)于有夾套的罐體，從上排水口進(jìn)水將夾套底部可能的沉積物清理干凈。
? 將罐蓋部分包括擋板、槳葉、軸封等位置用毛刷清理掉發(fā)酵液殘余，并沖洗干凈。
? 取下接種補(bǔ)料復(fù)用接口，清洗干凈。
? 清洗電極接口、空氣分布器等。
? 清洗其余部分。
? 清洗完成后將反應(yīng)器組裝復(fù)位。