接種/移種

火焰圈保護(hù)接種

準(zhǔn)備工作：操作人數(shù)以3人最佳，非操作人員離開房間，操作人員帶好口罩，隔熱手套；關(guān)閉門窗、空調(diào)風(fēng)扇；3人分別負(fù)責(zé)持接種鉗、傳遞種瓶和接種。
注意：嚴(yán)禁帶橡膠或者塑料薄膜手套，一旦發(fā)生燒傷會(huì)更嚴(yán)重。
? 用濕抹布蓋住攪拌電機(jī)以及周圍管道，以防止電機(jī)和硅膠管被燒壞。
? 向火圈棉花上滴加無水酒精至飽和并置于接種口。
? 關(guān)小進(jìn)氣流量，全開尾氣閥門。
? 預(yù)先擰松接種口蓋子。
? 持接種鉗者用接種鉗鉗住接種口蓋子，點(diǎn)燃火圈，用接種鉗擰下接種口蓋子，并置于接種口遠(yuǎn)離接種者方向，蓋子內(nèi)測朝向火焰。
? 傳遞種子瓶者將捆扎棉線解下，如是棉塞，將棉塞外部包裹紗布取下，遞給接種者。
? 接種者在火焰旁邊取下種瓶紗布或棉塞，火燒種瓶瓶口一圈后緩慢將種子液倒入罐中。然后遞給傳遞種瓶者，同時(shí)，傳遞種瓶者將下一瓶種子遞給接種者。
? 所有接種完成后持接種鉗者擰上罐蓋，用濕抹布熄滅火圈，恢復(fù)罐壓和通氣。
注意： 預(yù)先估計(jì)接種時(shí)間，保證火焰時(shí)間足夠長，如果種瓶數(shù)量較多，預(yù)先合瓶。
注意：接種速度不宜過快，否則可能會(huì)導(dǎo)致種子液溢出，導(dǎo)致無菌失效。
注意：接種后和種瓶上部溫度很高，禁止手持種瓶上部。
注意：嚴(yán)禁向燃燒的火圈上添加酒精。
注意：火圈掉落地面后立即用濕抹布覆蓋。

移種管道移種

準(zhǔn)備工作：

? 記錄此時(shí)所有發(fā)酵罐重量。
? 取下種子罐、發(fā)酵罐的取樣口末端，連接移種管道。
注意：移種準(zhǔn)備需要約40min，注意在移種前完成所有準(zhǔn)備操作

移種管道消毒：

? 依次從種子罐的最遠(yuǎn)端到種子罐打開蒸汽進(jìn)罐底閥、取樣閥，打開種子罐的移種管道排凝閥門，消毒30min。
? 記錄此時(shí)最遠(yuǎn)端發(fā)酵罐的罐重。

消毒結(jié)束：

? 關(guān)閉移種管道排凝閥門，依次從種子罐到最遠(yuǎn)端發(fā)酵罐關(guān)閉蒸汽進(jìn)罐底閥，罐底最后一個(gè)發(fā)酵罐罐底進(jìn)蒸汽閥門后立即打開此罐罐底閥，維持移種管道壓力。
? 待移種管道冷卻。

移種:

? 升高種子罐罐壓至0.1MPa，維持發(fā)酵罐罐壓0.05Mpa，從最遠(yuǎn)端發(fā)酵罐開始移種。
? 最遠(yuǎn)的發(fā)酵罐移種計(jì)量初始值以第二次記錄的罐重為準(zhǔn)，計(jì)算移入指定量的種子液后罐重。移種時(shí)，打開種子罐罐底閥，到達(dá)目標(biāo)罐重后關(guān)閉發(fā)酵罐罐底閥，保持種子罐罐底閥開啟。
? 從次遠(yuǎn)端發(fā)酵罐開始，以當(dāng)前的罐重作為計(jì)量初始值，計(jì)算移入指定量的種子液后罐重。打開對(duì)應(yīng)發(fā)酵罐罐底閥，等待到達(dá)目標(biāo)罐重后，關(guān)閉罐底閥。過程中保持種子罐罐底閥開啟。

移種結(jié)束

? 所有移種完成后，關(guān)閉種子罐罐底閥，將種子罐與移種管道連接斷開（可能會(huì)有發(fā)酵液濺出），移種管道置于水中，從最遠(yuǎn)端開始開啟所有發(fā)酵罐的蒸汽進(jìn)罐底閥，用蒸汽將移種管道沖洗干凈。關(guān)閉所有蒸汽進(jìn)罐底閥。
? 取下移種管道，恢復(fù)取樣口，（根據(jù)情況，如果需要取種后樣）再次打開蒸汽進(jìn)罐底閥對(duì)罐底閥繼續(xù)蒸汽消毒。
? 記錄此時(shí)所有發(fā)酵罐罐重，與第一次記錄的差值作為實(shí)際接種量。
? 清理移種管道中排出的發(fā)酵液，根據(jù)需要處理種子罐。

培養(yǎng)

補(bǔ)料

補(bǔ)料瓶制作

? 制作補(bǔ)料棉塞：取合適大小方形雙層紗布，中間依照補(bǔ)料硅膠管管徑大小穿孔，瓶內(nèi)硅膠管長度到平底，將紗布蒙住瓶口，硅膠管置于中央，逐層填充棉花，直到紗布進(jìn)入瓶內(nèi)2/3，繼續(xù)在瓶口堆棉花，然后扎緊紗布。
注意：棉花不能使用醫(yī)用脫脂棉。
注意：瓶內(nèi)管口要斜切，防止吸附到瓶壁無法出液。
注意；棉花填充松緊程度以拔出棉塞能聽到砰的一聲為好。
? 連接補(bǔ)料針頭：將硅膠管出口一側(cè)連接補(bǔ)料針頭，并用扎帶或者棉繩扎緊。

補(bǔ)料瓶的計(jì)量

? 記錄空瓶質(zhì)量（包括棉塞和硅膠管），固體料質(zhì)量，溶解后質(zhì)量，消后質(zhì)量。
? 瓶中溶液質(zhì)量濃度=固體料質(zhì)量/（消后質(zhì)量-空瓶質(zhì)量）

補(bǔ)料瓶的消毒

? 將補(bǔ)料針裝入無蓋的10mL離心管，在離心管口處對(duì)折，用紗布和牛皮紙包扎。
? 在補(bǔ)料管靠近瓶口處用棉線或者止水夾加死管道。
? 放入滅菌鍋消毒。

補(bǔ)料的連接

? 擰松補(bǔ)料接口帽。
? 點(diǎn)燃酒精棉球并置于補(bǔ)料口旁邊。
? 擰開補(bǔ)料接口。
? 取出補(bǔ)料針。
? 對(duì)準(zhǔn)補(bǔ)料硅膠墊中心位置，豎直扎入。
? 熄滅酒精棉球。
? 用75%酒精棉球塞住補(bǔ)料針周圍位置。
? 管道裝入蠕動(dòng)泵并加緊。
? 打開止水夾。
注意：消泡和pH控制的補(bǔ)料瓶制作同上，以下不再敘述。氨水、甲醇屬于易揮發(fā)物質(zhì)通常情況下無需并且不能進(jìn)行高溫消毒。

自動(dòng)/手動(dòng)補(bǔ)料

? 手動(dòng)補(bǔ)料：按下面板上手動(dòng)補(bǔ)料按鈕，補(bǔ)料泵將持續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)，直到到達(dá)所需補(bǔ)料量。
? 自動(dòng)補(bǔ)料：按下面板上自動(dòng)補(bǔ)料按鈕，補(bǔ)料泵將按照設(shè)定的占空比控制泵的開停。

換料

? 當(dāng)一瓶補(bǔ)料接近用完時(shí)，在控制面板上停止自動(dòng)或者手動(dòng)補(bǔ)料。
? 按下?lián)Q料按鈕。
? 將補(bǔ)料針頭從補(bǔ)料硅膠墊上拔出，塞入一小團(tuán)酒精棉，擰上補(bǔ)料口蓋。
? 將補(bǔ)料管用止水夾夾住并從蠕動(dòng)泵上取下。
? 按照上述方法將一瓶新的補(bǔ)料連接到一個(gè)未用過的補(bǔ)料口。
? 控制面板上關(guān)閉換料操作。
? 繼續(xù)按照工藝補(bǔ)料。
注意：如果沒有點(diǎn)擊換料按鈕，會(huì)使得補(bǔ)料累計(jì)不準(zhǔn)確。

消泡

? 手動(dòng)消泡，按下面板上手動(dòng)按鈕，消泡泵將持續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)泵入消泡劑。
? 自動(dòng)消泡，連接好液位傳感器，當(dāng)有泡沫時(shí)，系統(tǒng)報(bào)警，同時(shí)啟動(dòng)消泡泵，按照設(shè)定的占空比補(bǔ)加消泡劑。
? 作為補(bǔ)料，按下消泡模式，可將消泡泵作為補(bǔ)料泵使用，方法同上所述。

pH控制

? 首先確定發(fā)酵過程中pH控制方向，在面板上確認(rèn)控制方式。
? 連接好酸（堿），點(diǎn)下面板上的pH自動(dòng)。當(dāng)pH向控制方向的反方向偏移超過設(shè)定值后，就會(huì)自動(dòng)補(bǔ)加酸（堿）。

取樣

? 取樣前消毒：打開罐底進(jìn)蒸汽閥，取樣閥，排出管道內(nèi)冷凝水；關(guān)小取樣閥，維持取樣口有少許蒸汽和冷凝水排出，維持20min。
? 取樣：關(guān)閉蒸汽進(jìn)罐底閥，打開罐底閥，排出少量料液后，用離心管或者小三角瓶取樣，取樣后關(guān)閉罐底閥。
? 取樣后消毒：打開罐底進(jìn)蒸汽閥，排出管道內(nèi)殘余發(fā)酵液后，關(guān)小取樣閥，維持取樣口有少許蒸汽和冷凝水排出，維持20min，關(guān)閉蒸汽進(jìn)罐底閥，關(guān)閉取樣閥。

結(jié)束

停止發(fā)酵

? 關(guān)閉所有自控（溫度、pH、流量、攪拌、DO）
? 關(guān)閉空氣進(jìn)罐體隔膜閥
? 關(guān)閉尾氣冷凝進(jìn)水回水閥門
? 排氣閥門全開
? 關(guān)閉尾氣分析閥門
注意：若在連續(xù)使用中減少過濾器消毒次數(shù)，關(guān)閉質(zhì)量流量計(jì)之前打開質(zhì)量流量計(jì)旁路閥門，然后關(guān)閉空氣進(jìn)罐體隔膜閥以保證過濾器前正壓。

滅活發(fā)酵液

? 蒸汽煮：開攪拌200rpm，關(guān)閉夾套進(jìn)水閥門，夾套排水閥門，打開夾套排凝閥門，夾套進(jìn)蒸汽閥門，將罐溫升高到100℃，維持10min，降溫，排放處理
? 堿水泡：直接將發(fā)酵液排放到水桶，加入適量的片堿，浸泡2小時(shí)以上，排放處理
注意：如果發(fā)酵液有后處理，按后處理需要進(jìn)行處理。

清洗

? 拆下電機(jī)電源線、電極測速線、壓力傳感器變送線、視鏡燈。
? 拆下pH、DO電極，用水清洗干凈分別浸入飽和KCl和水中；電極口裝上悶頭。
? 取下排氣冷凝器，并清洗。
? 取下補(bǔ)料針頭。
? 取下電機(jī)妥善放好。
? 取下所有罐蓋連接螺絲。
? 拉住罐蓋提手取下罐蓋，取罐蓋過程中，攪拌軸不得與罐壁碰撞，不得用手握攪拌軸，取出后攪拌軸朝上放置。
? 清洗罐蓋和罐體，必要時(shí)擰下罐底進(jìn)行清洗。
? 清洗完畢后將罐蓋放回，接種口朝外，邊緣對(duì)齊，擰緊罐蓋（對(duì)稱擰緊）。
? 電機(jī)接口朝后裝回電機(jī)，擰緊電機(jī)固定螺絲，連接電機(jī)電源和測速。
? 安裝排氣冷凝罐和尾氣管。
? 若要長期不用，用空氣將罐內(nèi)吹干。